Techniques de biologie moléculaire

THÉORIE (7h)

INTRODUCTION
– Définition et historique de la biologie moléculaire
– ADN et ARN : structure, fonction, organisation, propriétés physico-chimiques
– Matériel, équipements spécifiques et sécurité au laboratoire de biologie moléculaire

OUTILS MOLÉCULAIRES
– Enzymes : enzymes de restriction et autres nucléases, ligases, polymérases
– Vecteurs : plasmides, phagémides, cosmides, BACs, YACs …
– Banques d’ADN génomique et d’ADN complémentaire
– Outils innovants (CRISPR-Cas9, biopuces…)
– Ressources bio-informatiques et outils in silico

TECHNIQUES CLASSIQUES
– Electrophorèse : principe, méthodes, lecture et interprétation des résultats, optimisation
– Digestions enzymatiques : principe, méthode et optimisation
– Extraction et purification d’ADN
– PCR : principe et méthodes
– Séquençage : principe, méthodes (Sanger et NGS), lecture et interprétation des résultats
– Blots : principe et méthodes (Northern, Southern et dot blots).
– Etude de cas : Carte de restriction d’un plasmide ; Identification par PCR, RFLP, SSCP ; Clonage d’un ADN d’intérêt et transformation bactérienne

MISE EN PRATIQUE (14h)

– Manipulations de bases : pipetage des réactifs, vortex, centrifugation, préparation et réalisation d’une électrophorèse, dépôts sur gel d’agarose, marquage de l’ADN, culture d’un clone bactérien
– Applications : carte de restriction d’une séquence d’ADN, PCR, minipréparation d’un plasmide
– Manipulation des outils in silico