HPLC – Principes et pratique pour le contrôle qualité

1) Présentation de la CLHP
– Les techniques courantes de la CLHP

• Chromatographie d’adsorption, chromatographie en Phase Inverse, échange d’ions, techniques du recul d’ionisation et de la paire d’ions
• Chromatographie d’interaction hydrophile (HILIC)

2) Méthodes de fabrication des supports pour la chromatographie.
– Le traitement de la silice, les techniques de greffage
– Conséquences sur les caractéristiques des colonnes
– Les tendances récentes des techniques de greffage
– Monolithes et particules Fused Core Shell
– Les supports polaires non greffés, polaires greffés, non polaires greffés et leurs domaines d’application.

3) Précautions à l’utilisation des colonnes
– Installation
– Utilisation
– Influence des phases mobiles tamponnées
– Influence du contre-ion, influence de l’ion, influence de la concentration, influence de la température
– Règles de préparation des phases mobiles tamponnées
– Suivi des performances
– Protection et stockage

4) Résolution des anomalies de fonctionnement.
– Problèmes liés à la forme des pics
– Effets extra colonne, effet de surcharge, effets des interactions secondaires, effets de la distribution des échantillons, effets de tassement, effets des équilibres secondaires.
– Problèmes liés au temps de rétention
– Variation aléatoire du temps de rétention, dérive du temps de rétention.
– Autres anomalies
– Pics «fantômes», perte de charge, dérive de la ligne de base

5) Rôle du test de conformité en CLHP
– Critère de répétabilité, critère de résolution, critère d’asymétrie, critère d’efficacité
– Bruit de fond, dérive de la ligne de base, critères de rétention, perte de charge, facteurs de réponse